Biocoll細(xì)胞分離液正確分離方法和操作時(shí)的注意事項(xiàng)
更新時(shí)間：2022-05-23 | 點(diǎn)擊率：1213
Biocoll細(xì)胞分離液是最早由德國(guó)Biochrom公司推出的新一代分離液。它除了可分離淋巴細(xì)胞外，更常用于胰島細(xì)胞的分離。胰島細(xì)胞的移植是一種有效的糖尿病新型療法，可解決特別是I型糖尿病患者的胰島細(xì)胞不足及功能低下的問(wèn)題。
Biocoll細(xì)胞分離液分離方法會(huì)影響胰島的產(chǎn)率和存活率：
因此，取材時(shí)需要注意
1.胰臟應(yīng)快速取材，保持包膜完整。
2.對(duì)胰臟進(jìn)行評(píng)估，在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。
3.消化過(guò)程不宜進(jìn)行震蕩，以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化，而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。
4.要保證胰島的包膜完整，消化不能太充分。寧可不足，也不可過(guò)頭，否則會(huì)影響胰島純化的產(chǎn)率。
Biocoll細(xì)胞分離液操作步驟及注意：
1.取全血，使用等量PBS稀釋。（全血：HBSS=1:1）
2.取離心管，加入與血稀釋液等量的PBS于管底，將血液稀釋液小心加至PBS液面上層。（小心不要使兩種溶液混合，吸頭接近液面，貼壁緩慢加入，尤其是兩種溶液剛接觸到的時(shí)候，一定要慢！慢！再慢?。?/div>
3.離心：800g，30min，需要將制動(dòng)降至低，即離心機(jī)自然降速至0，離心完畢將得到如圖所示分層（一定要自然降速，或者只有1-2成的制動(dòng)）
4.吸取白膜層至新15mL離心管中。
5.白膜層液體加10~15mlPBS離心，300g，10min，棄上清。沉淀再加PBS清洗一次，棄上清。
6.沉淀加入正常培養(yǎng)的*培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，2~3小時(shí)，使單核細(xì)胞貼壁。
7.鏡下觀察細(xì)胞貼壁后，更換培養(yǎng)基，去除未貼壁細(xì)胞，保留下來(lái)的即為所需的單核細(xì)胞。
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400-166-8600
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