支原體污染解決方案

支原體污染在世界范圍內(nèi)的細胞實驗室中，屬于比較常見的一類污染。細胞污染一旦污染了支原體，會給細胞培養(yǎng)帶來一系列嚴重的后果。

本期內(nèi)容，就細胞培養(yǎng)過程中，支原體污染的危害、如何預防支原體污染、如何祛除支原體污染做解讀。

一

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支原體污染的危害

支原體個頭很小，可以感染多種真核細胞系，包括研究中常用的人類和動物細胞系。雖然支原體感染的前期，可能并不總是導致受感染細胞發(fā)生明顯變化，但它會對細胞生理學和實驗結(jié)果產(chǎn)生重大影響。

支原體影響細胞生長的主要方式之一是改變細胞代謝。支原體已被證明會耗盡培養(yǎng)基中的葡萄糖和氨基酸等營養(yǎng)物質(zhì)，從而導致細胞生長和增殖減少。此外，支原體會產(chǎn)生對細胞有毒的代謝廢物，例如過氧化氫和氨。

支原體感染還可以改變受感染細胞中基因和蛋白質(zhì)的表達。研究表明，支原體可以誘導基因表達和可變剪接的變化，從而導致蛋白質(zhì)表達和細胞功能的改變。例如，支原體感染已被證明可以下調(diào)參與細胞周期調(diào)節(jié)的基因，并上調(diào)參與炎癥和免疫反應的基因。

支原體影響細胞生長的另一種方式是誘導細胞應激反應。支原體感染已被證明可激活細胞應激通路，如未折疊蛋白反應和自噬，這可導致細胞功能改變和細胞活力降低。

支原體還會影響受感染細胞在檢測和實驗中的行為。支原體污染會導致實驗結(jié)果的可變性增加、再現(xiàn)性降低以及假陽性或假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。此外，支原體可以改變細胞對藥物和其他刺激的反應，這可能導致關(guān)于藥物療效或毒性的錯誤結(jié)論。

總之，支原體污染會對細胞生長和行為以及實驗結(jié)果產(chǎn)生重大影響。研究人員應采取適當措施預防、檢測支原體污染。

二

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支原體污染的預防

防止支原體污染的第一步是保持無菌實驗室環(huán)境。所有設(shè)備和表面都必須使用適當?shù)脑噭┒ㄆ谇鍧嵑拖?，培養(yǎng)箱水槽等水浴環(huán)境，也應防止消毒劑成分。此外，在處理細胞培養(yǎng)物時應佩戴手套和實驗室外套等個人防護設(shè)備，以防止意外污染。

德國Minerva Biolabs生產(chǎn)

支原體祛除噴霧

Mycoplasma-off

德國Minerva Biolabs生產(chǎn)

水槽支原體預防試劑

Water Shield

另一個重要措施是在細胞培養(yǎng)過程的所有步驟中使用無菌試劑和培養(yǎng)基。這包括使用無菌移液器、過濾器和其他一次性設(shè)備。所有培養(yǎng)基和試劑都應適當儲存以防止污染。

應盡可能使用之前經(jīng)過測試和證明不含支原體的細胞系。定期檢測細胞培養(yǎng)物是否存在支原體污染也很重要，即使使用經(jīng)過認證的細胞系也是如此。

三

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支原體的檢測

如何檢測支原體前期內(nèi)容我們也有詳細講過，有常規(guī)PCR檢測試劑盒以及qPCR檢測試劑盒兩大類可供選擇。

具體內(nèi)容可以參考下面這篇文章：

『支原體檢測方法』到底應該怎樣選？

四

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支原體的祛除

如果在細胞培養(yǎng)物中檢測到支原體污染，必須立即采取措施消除污染。第一步是將受影響的培養(yǎng)物與其他細胞培養(yǎng)物隔離，以防止污染擴散。

受影響的培養(yǎng)物應該被丟棄，并對環(huán)境進行清潔，參考支原體預防這一章節(jié)的內(nèi)容。新的培養(yǎng)物應該從冷凍儲備或無支原體細胞系開始。

針對不同類型的培養(yǎng)物，還可選擇用于細胞中的支原體祛除試劑：

Zell Shield

對于費力擴增的細胞（如已染，或經(jīng)過體外刺激），如果細胞中發(fā)現(xiàn)有支原體污染，但此細胞又不愿丟棄，希望繼續(xù)培養(yǎng)，推薦使用MB公司生產(chǎn)的復合抗生素Zell Shield。

Mynox

無法長期培養(yǎng)的珍貴樣本或病毒收獲液，則推薦使用德國MB公司的Mynox® ，處理3小時，直接殺除。

Mynox Gold

可以培養(yǎng)超過一個月的細胞，則推薦使用德國MB公司的Mynox® Gold，直接殺除+鞏固防護兩步處理。