支原體PCR絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)支原體PCR或qPCR方法進(jìn)行驗(yàn)證，除了可參考試劑盒生產(chǎn)廠家自身的驗(yàn)證外（盡管它不能*替代用戶自己的驗(yàn)證，但可提供特異性驗(yàn)證的一些信息，如使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA、某些細(xì)菌菌屬DNA等，而不必使用者自己再去嘗試），用戶自己主要是對(duì)方法的檢測(cè)限和耐用性進(jìn)行驗(yàn)證，這里常用的就是10CFU支原體標(biāo)準(zhǔn)品。100CFU標(biāo)準(zhǔn)品可作為一個(gè)補(bǔ)充。

　　支原體PCR絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品的說(shuō)明：

　　1.定量標(biāo)準(zhǔn)品dna包括支原體基因組dna和細(xì)菌基因組dna，用于梯度稀釋后，qpcr標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

　　2.支原體基因組dna用于支原體核酸擴(kuò)增檢測(cè)的方法學(xué)驗(yàn)證，包括確定支原體qpcr方法的檢測(cè)限。

　　3.細(xì)菌定量標(biāo)準(zhǔn)品dna用于qpcr檢測(cè)水中細(xì)菌的精確定量。

　　復(fù)溶操作：

　　1.標(biāo)準(zhǔn)品短時(shí)離心，以收集凍干粉至管底。

　　2.取試劑盒提供的tris緩沖液（白蓋）100µl，加入到標(biāo)準(zhǔn)品管內(nèi)（綠蓋）。

　　3.室溫下靜置5分鐘。

　　4.渦旋混合10秒鐘，離心5秒鐘。

　　5.選合適體積的復(fù)溶dna用于pcr擴(kuò)增或梯度稀釋，以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　支原體PCR絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品每批支原體都會(huì)提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值，以方便二者的換算。因?yàn)?0CFU只能確定PCR能夠達(dá)到的檢測(cè)限在10CFU以下，但無(wú)法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標(biāo)定的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品則可進(jìn)一步確定檢測(cè)限的數(shù)值。而且核酸法最終檢測(cè)的對(duì)象是核酸，而產(chǎn)品的QC主要關(guān)注的是支原體，核酸的存在是側(cè)面反映支原體存在的一個(gè)指標(biāo)。CFU與基因拷貝數(shù)的比值很好地對(duì)二者進(jìn)行了關(guān)聯(lián)。